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miR-216b在急性髓系白血病的意义

来源:
时间:2019-09-21 03:31
作者:admin666
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【摘要】目的探讨微小RNA-216b(microRNA-216b,miR-216b)在急性髓系白血病(acutemyelogenousleukemia,AML)中的表达及意义。方法急性髓细胞白血病患者53例作为AML组,同期31例原发性免疫性血小板减少症(Primaryimmunethrombocytopenia,ITP)患者作为对照组。提取骨髓单个核细胞,检测miR-216b的表达水平,分析其与临床特征的关系。结果AML组miR-216b相对中位表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);SML患者不同FAB分型、染色体核型和基因突变类型miR-216b表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05);根据miR-216b相对中位表达水平,以0.345作为分界,将53例AML患者分为高表达和低表达组;高表达组和低表达组在性别、年龄、血红蛋白、血小板计数和完全缓解率差异无统计学意义(P>0.05);高表达组WBC计数、白细胞计数和骨髓原始细胞比例低于低表达组,1年内完全缓解后复发率和1年死亡率均高于低表达组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论miR-216b在AML患者中表达水平高于对照组,与疾病复发和生存有一定的关联。

【关键词】miR-216b;急性髓系白血病;临床意义

急性髓系白血病(acutemyelogenousleukemia,AML)是一种细胞遗传学和分子异构的疾病,以骨髓原始细胞异常的克隆增殖和髓系前体细胞分化阻滞为特征,其临床治疗结果较差[1]。微小RNA(microRNA,miR)一组内源性非编码的小RNA,通过RNA干扰途径影响靶基因的表达来发挥作用。当miR水平失调时可以导致抑癌基因的功能失调,对人类癌症发生发展产生重要影响[2]。同时,这些miR具有功能性的相关性,可作为癌症诊断和预后的潜在生物标记物[3]。一些miR与白血病的发展有关,如miR-15a与慢性淋巴细胞白血病(ChronicLymphocyticLeukemia,CLL)的发展有关[4]。研究表明,miR-216b在鼻咽癌、肝细胞癌、胰腺导管腺癌、乳腺癌等肿瘤性疾病中存在差异表达,但在血液肿瘤方面研究较少[5-8]。因此,本研究通过检测AML患者miR-216b的表达水平,分析其与临床特征的关系,确定其作为判断AML患者的预后信息的生物标志物。

1资料与方法

1.1一般资料选取我院血液科2014年1月至2017年6月收治并明确为急性髓细胞白血病患者53例作为AML组,其中男33例,女20例;年龄18~69岁;中位年龄45岁。根据French-America-British(FAB)分型方法将53例AML患者分为M2型18例、M3型7例、M4型5例和M5型23例。进行临床及血常规、骨髓象和免疫组织化学染色确诊、染色体核型分析和基因突变类型检测。染色体核型分析结果如下:正常核型(10例)、无分裂相(16例)、t型包括t(8;21)型和t(15;17)型(13例)、复杂核型(11例)和其他类型的染色体核型(3例)。基因突变类型结果如下:DNMT3A突变(6例)、FLT3-TID/TKD突变(5例)、c-Kit突变(7例)、NPM1突变(11例)和无突变(24例)。所有AML患者均为初治患者,未接受过任何抗肿瘤药物治疗,没有其他恶性肿瘤和严重心、肝、肾疾病。选择我院同期31例原发性免疫性血小板减少症(Primaryimmunethrombocytopenia,ITP)患者作为对照组,其中男17例,女14例;年龄19~72岁;中位年龄43岁。所有AML患者均按照成人急性髓系白血病(非急性早幼粒细胞白血病)中国诊疗指南标准方案第1次化疗(28d)结束后进行疗效评估[9]。进行1年随访。本研究获得医院医学伦理学委员会批准,患者及家属知情同意并签署知情同意书。1.2相关定义完全缓解定义为血象血红蛋白>90g/L,白细胞正常或减低,分类无幼稚细胞,血小板>10×109/L,骨髓象原始细胞加早幼阶段细胞(或幼稚细胞)<5%,红细胞系统及巨核细胞;完全缓解后复发定义为是指由于疾病的原因,骨髓中原始细胞比例>5%或外周血中出现白血病细胞。1.3主要试剂与仪器人淋巴细胞分离液(Ficoll)(上海博升生物科技有限公司);Poly(A)TailingKit(美国lifetechnologies公司);氯仿、异丙醇和乙醇(国药集团化学试剂有限公司);TrizolReagentRNA提取试剂盒(美国Invitrogen公司);PrimeScriptRTreagentKitPerfectRealTimeRNA反转录试剂盒(大连TaKaRa公司);TaqMan2×UniversalPCRMasterMix(美国ABI公司);miR-216b和U6snRNA探针引物序列由ABI公司设计合成,引物编号:miR-216b(002215-PN4426784)、U6snRNA(001973-PN4427975);NanoDrop2000c型蛋白核酸检测仪(美国Thermo公司);实时荧光定量PCR仪(美国BIO-RAD公司)。1.4RT-PCR检测miR-216b表达水平所有患者在入院后第2天用抗凝管采集所有研究对象骨髓2ml,立即用Ficoll分离骨髓单个核细胞今晚上出了什么特号码,加入1mlTrizol,-80℃保存备用。根据TrizolReagentRNA提取试剂盒操作说明书进行总RNA提取,采用Poly(A)TailingKit试剂盒按说明书进行加尾,根据反转录试剂盒说明合成cDNA,据SYBRPremixExTaqTMII荧光定量PCR试剂盒说明进行PCR扩增。PCR扩增反应条件为95℃30s,93℃10s,60℃3s,40个循环,61℃时采集荧光,用实时荧光定量PCR仪检测对其表达量进行结果分析,以U6snRNA作为内参,根据CT值,计算miR-216b表达量。每个标本采用三复孔。1.5统计学分析应用SPSS19.0统计软件,实验数据因不符合正态分布,以中位数(最小值~最大值)表示,采用秩和检验;计数资料采用例数表示,采用χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.12组研究对象miR-216b表达水平比较AML组miR-216b相对中位表达水平为0.345(0.000~14.676),高于对照组的0.069(0.000~1.000),差异有统计学意义(P<0.05)。2.2不同FAB分型AML患者miR-216b表达水平比较各FAB分型AML患者miR-216b表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。2.3不同染色体核型AML患者miR-216b表达水平比较各染色体核型AML患者miR-216b表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。2.4不同基因突变类型AML患者miR-216b表达水平比较各基因突变类型AML患者miR-216b表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表4。2.5不同miR-216b表达水平与临床资料的关系根据miR-216b相对中位表达水平,以0.345作为分界,将53例AML患者分为高表达和低表达组。高表达组和低表达组在性别、年龄、血红蛋白、血小板计数比较,差异无统计学意义(P>0.05);高表达组WBC计数、白细胞计数和骨髓原始细胞比例低于低表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表5。2.6不同miR-216b表达水平与疗效的关系高表达组和低表达组的完全缓解率无明显差异(P>0.05);高表达组的1年内完全缓解后复发率和1年死亡率均高于低表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表6。

3讨论

在过去的几年里,大量的研究已经将miR的表达与各种疾病的发生联系起来(包括癌症在内)[10]。除了调控miR表达的机制外,细胞遗传改变也能发挥作用[11]。在正常或肿瘤组织的不同细胞群中,miR在生物学上的作用可能因其表达的不同而不同。越来越多的研究表明,miR-216b在多种癌症的癌变过程中起着至关重要的作用[12]。miR-216b在肿瘤的第一次报道是通过靶向调控鼻咽癌细胞增殖、侵袭和肿瘤生长有负面影响[13]。后续的研究表明,miR-216b通过靶向调控SDCBP抑制乳腺癌生长和转移[14];miR-216b通过调控P2X7R可以影响乳腺癌肿瘤发生过程中的细胞生长和凋亡[15];同时,miR-216b通过HBx-miR-216b-IGF2BP2信号通路参与肝细胞癌的发病和进展,发现miR-216b降低并抑制HepG2细胞的生长[16]。此外,少数研究也表明,miR-216b在癌症治疗中发挥了重要的耐药作用。例如,通过靶向FGFR1,miR-216b对无EGFR或KRAS突变的胰腺导管腺癌患者给予放疗敏感性[17]。本研究通过研究miR-216b在骨髓母细胞中的表达水平的变化与AML分型和临床治疗效果的关系,探讨miR-216在急性髓系白血病AML中的表达及意义。miR-216在早期复发的儿童急性淋巴细胞白血病中显著升高[12]。本研究研究发现,在AML患者miR-216b的表达水平较对照组明显增加,与上述研究结果一致,这表明miR-216b在AML的发病机制中发挥了作用。miR-216b过表达与AML中的几种常见基因突变相关,这些基因突变之间具体联系的潜在机制尚不清楚[18]。但本研究AML患者miR-216b的表达水平在不同FAB分型、染色体核型、基因突变类型方面没有明显差异。同时,高表达组WBC计数、白细胞计数和骨髓原始细胞比例低于低表达组,提示miR-216b能反映一定的肿瘤负荷水平。此外,随访患者接受诱导化疗后治愈、复发和1年死亡率的关系发现,高表达组和低表达组的完全缓解率无明显差异,1年内完全缓解后复发率和1年死亡率均高于低表达组,miR-216b低表达组优势显著。因此,我们推断在白血病发生发展过程中激活了miR-216b的表达,提示miR-216b可能是白血病发生过程中的一种致癌基因,可作为AML中与疾病复发相关的生物标志物。综上所述,miR-216b在AML患者中呈现显著高表达,与临床特征有一定的关联。miR-216b高表达患者其复发率和死亡率高于低表达者,提示预后不良,发挥促癌作用,可能作为AML中与疾病复发相关的生物标志物,但其调控机制及生物学功能做进一步的研究。

作者:崔婷婷 柴俊月 郑雯琦 魏娜